肝癌患者循环肿瘤细胞PD-L1表达及其临床意义

doi:10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2020.03.012

目的

探讨原发性肝癌（肝癌）患者外周血循环肿瘤细胞（CTC）的程序性死亡-配体1（PD-L1）表达及其与肝癌患者临床病理特征的关系。

方法

回顾性分析2017年1月至2019年12月中山大学孙逸仙纪念医院收治的30例肝癌患者临床资料。患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。其中男27例，女3例；年龄29～77岁，中位年龄51岁。多重RNA原位分析检测患者外周血中CTC分型及其PD-L1表达水平，分析PD-L1表达与临床病理特征之间的相关性。相关性分析采用χ²检验或Fisher确切概率法。

结果

共检出CTC 275个，其中上皮型82个，间质型51个，混合型142个。混合型PD-L1平均表达水平为0.89，明显高于上皮型的0.55及间质型的0.49。混合型CTC为主型肝癌患者数量及PD-L1表达水平亦明显高于其他分型患者。PD-L1阳性的CTC分型与患者肝硬化及肝被膜侵犯相关（χ²=9.707，7.153；P<0.05）。肝癌患者平均PD-L1表达水平仅与患者饮酒史相关（P=0.042）。

结论

肝癌患者CTC以混合型为主，其PD-L1表达水平高于其他分型患者。PD-L1阳性的CTC分型与肝硬化及肝被膜侵犯相关，而PD-L1表达水平仅与患者饮酒史相关。

关键词: 癌，肝细胞, 程序性死亡-配体1, 肿瘤细胞，循环

Objective

To investigate the classification of programmed death-ligand 1 (PD-L1) in the circulating tumor cells (CTCs) of peripheral blood and its relationship with the clinicopathologic feature of patients with primary liver cancer (PLC).

Methods

Clinical data of 30 PLC patients admitted to Sun Yat-sen Memorial Hospital of Sun Yat-sen University from January 2017 to December 2019 were retrospectively analyzed. The informed consents of all patients were obtained and the local ethical committee approval was received. Among them, 27 patients were male and 3 female, aged 29-77 years with a median age of 51 years. The classifications of CTCs in the peripheral blood and the corresponding expression level of PD-L1 were determined by multiple RNA in situ analysis. The correlation between PD-L1 expression and clinicopathologic feature was analyzed by Chi-square test or Fisher's exact probability.

Results

A total of 275 CTCs were detected, including 82 epithelial-type CTCs, 51 interstitial-type CTCs and 142 mixed-type CTCs. The average expression level of PD-L1 in the mixed-type CTCs was 0.89, significantly higher than 0.55 in the epithelial-type and 0.49 in the interstitial-type CTCs. The number of PLC patients with mixed-type CTCs and their expression level of PD-L1 were also significantly higher than those with other phenotypes. The classification of CTCs with positive PD-L1 was significantly associated with liver cirrhosis and liver capsule invasion (χ2=9.707, 7.153; P<0.05). The average expression level of PD-L1 in PLC patients was only correlated with the history of alcohol drinking (P=0.042).

Conclusions

The classification of CTCs in PLC patients is mainly mixed-type. Its expression level PD-L1 is higher than those with other phenotypes. The classification of PD-L1-positive CTCs is associated with liver cirrhosis and liver capsule invasion, whereas PD-L1 expression level is only correlated with the alcohol drinking history of PLC patients.

Key words: Carcinoma, hepatocellular, programmed death-ligand 1 (PD-L1), Neoplastic cells, circulating

图1 CTC不同上皮细胞表型标志物及PD-L1表达

表1 肝癌患者外周血CTC分型及其PD-L1表达水平

分型		数量	百分率（%）	PD-L1表达水平
CTC表型		?	?	?
?	上皮型	82个	30	0.55
?	间质型	51个	18	0.49
?	混合型	142个	52	0.89
CTC阳性患者分型		?	?	?
?	上皮型为主型	5例	17	0.57
?	间质型为主型	6例	20	0.38
?	混合型为主型	11例	37	0.90
?	均匀分布型	8例	26	0.75

表1 肝癌患者外周血CTC分型及其PD-L1表达水平

分型		数量	百分率（%）	PD-L1表达水平
CTC表型		?	?	?
?	上皮型	82个	30	0.55
?	间质型	51个	18	0.49
?	混合型	142个	52	0.89
CTC阳性患者分型		?	?	?
?	上皮型为主型	5例	17	0.57
?	间质型为主型	6例	20	0.38
?	混合型为主型	11例	37	0.90
?	均匀分布型	8例	26	0.75

表2 PD-L1阳性CTC不同分子表型与肝癌患者临床病理特征的相关性（个）

参数		例数	PD-L1阳性CTC数	PD-L1阳性CTC分型			χ ²值	P值
参数		例数	PD-L1阳性CTC数	上皮型	间质型	混合型	χ ²值	P值
年龄（岁）		?	?	?	?	?	5.897	0.052
?	≤50	14	84	16	9	59	?	?
?	>50	16	65	21	11	33	?	?
饮酒史		?	?	?	?	?	2.473	0.290
?	无	25	111	24	16	71	?	?
?	有	5	38	13	4	21	?	?
乙肝病史		?	?	?	?	?	1.331	0.514
?	无	11	62	18	9	35	?	?
?	有	19	87	19	11	57	?	?
肝硬化		?	?	?	?	?	9.707	0.008
?	无	8	22	7	7	8	?	?
?	有	22	127	30	13	84	?	?
肿瘤数目		?	?	?	?	?	0.907	0.635
?	单发	18	87	23	13	51	?	?
?	多发	12	62	14	7	41	?	?
肿瘤直径（cm）		?	?	?	?	?	1.942	0.379
?	≤5	17	106	23	15	68	?	?
?	>5	13	43	14	5	24	?	?
静脉癌栓		?	?	?	?	?	1.927	0.382
?	无	21	114	30	17	67	?	?
?	有	9	35	7	3	25	?	?
微血管癌栓		?	?	?	?	?	2.358	0.308
?	无	15	83	21	14	48	?	?
?	有	15	66	14	6	44	?	?
肝被膜侵犯		?	?	?	?	?	7.153	0.028
?	无	16	88	25	16	47	?	?
?	有	14	61	12	4	45	?	?
远处转移		?	?	?	?	?	4.214	0.122
?	无	23	121	30	13	78	?	?
?	有	7	28	7	7	14	?	?
TNM分期		?	?	?	?	?	1.719	0.423
?	Ⅰ/Ⅱ期	14	92	22	10	60	?	?
?	Ⅲ/Ⅳ期	16	57	15	10	32	?	?
AFP （μg/L）		?	?	?	?	?	0.383	0.826
?	≤400	24	128	32	18	78	?	?
?	>400	6	21	5	2	14	?	?
HBsAg		?	?	?	?	?	1.404	0.496
?	阴性	16	101	28	13	60	?	?
?	阳性	14	48	9	7	32	?	?

表2 PD-L1阳性CTC不同分子表型与肝癌患者临床病理特征的相关性（个）

参数		例数	PD-L1阳性CTC数	PD-L1阳性CTC分型			χ ²值	P值
参数		例数	PD-L1阳性CTC数	上皮型	间质型	混合型	χ ²值	P值
年龄（岁）		?	?	?	?	?	5.897	0.052
?	≤50	14	84	16	9	59	?	?
?	>50	16	65	21	11	33	?	?
饮酒史		?	?	?	?	?	2.473	0.290
?	无	25	111	24	16	71	?	?
?	有	5	38	13	4	21	?	?
乙肝病史		?	?	?	?	?	1.331	0.514
?	无	11	62	18	9	35	?	?
?	有	19	87	19	11	57	?	?
肝硬化		?	?	?	?	?	9.707	0.008
?	无	8	22	7	7	8	?	?
?	有	22	127	30	13	84	?	?
肿瘤数目		?	?	?	?	?	0.907	0.635
?	单发	18	87	23	13	51	?	?
?	多发	12	62	14	7	41	?	?
肿瘤直径（cm）		?	?	?	?	?	1.942	0.379
?	≤5	17	106	23	15	68	?	?
?	>5	13	43	14	5	24	?	?
静脉癌栓		?	?	?	?	?	1.927	0.382
?	无	21	114	30	17	67	?	?
?	有	9	35	7	3	25	?	?
微血管癌栓		?	?	?	?	?	2.358	0.308
?	无	15	83	21	14	48	?	?
?	有	15	66	14	6	44	?	?
肝被膜侵犯		?	?	?	?	?	7.153	0.028
?	无	16	88	25	16	47	?	?
?	有	14	61	12	4	45	?	?
远处转移		?	?	?	?	?	4.214	0.122
?	无	23	121	30	13	78	?	?
?	有	7	28	7	7	14	?	?
TNM分期		?	?	?	?	?	1.719	0.423
?	Ⅰ/Ⅱ期	14	92	22	10	60	?	?
?	Ⅲ/Ⅳ期	16	57	15	10	32	?	?
AFP （μg/L）		?	?	?	?	?	0.383	0.826
?	≤400	24	128	32	18	78	?	?
?	>400	6	21	5	2	14	?	?
HBsAg		?	?	?	?	?	1.404	0.496
?	阴性	16	101	28	13	60	?	?
?	阳性	14	48	9	7	32	?	?

表3 外周血CTC中PD-L1高表达与肝癌患者临床病理特征的相关性（例）

参数		例数	PD-L1表达水平		P值
参数		例数	低表达	高表达	P值
年龄（岁）		?	?	?	0.272
?	≤50	14	5	9	?
?	>50	16	10	6	?
饮酒史		?	?	?	0.042
?	无	25	15	10	?
?	有	5	0	5	?
乙肝病史		?	?	?	1.000
?	无	11	6	5	?
?	有	19	9	10	?
肝硬化		?	?	?	0.682
?	无	8	5	3	?
?	有	22	10	12	?
肿瘤数目		?	?	?	0.710
?	单发	18	8	10	?
?	多发	12	7	5	?
肿瘤直径（cm）		?	?	?	1.000
?	≤5	17	9	8	?
?	>5	13	6	7	?
静脉癌栓		?	?	?	0.427
?	无	21	12	9	?
?	有	9	3	6	?
微血管癌栓		?	?	?	0.143
?	无	15	10	5	?
?	有	15	5	10	?
肝被膜侵犯		?	?	?	0.715
?	无	16	9	7	?
?	有	14	6	8	?
远处转移		?	?	?	1.000
?	无	23	12	11	?
?	有	7	3	4	?
TNM分期		?	?	?	1.000
?	Ⅰ/Ⅱ期	14	7	7	?
?	Ⅲ/Ⅳ期	16	8	8	?
AFP（μg/L）		?	?	?	0.651
?	≤400	24	13	11	?
?	>400	6	2	4	?
HBsAg		?	?	?	0.715
?	阴性	16	9	7	?
?	阳性	14	6	8	?

表3 外周血CTC中PD-L1高表达与肝癌患者临床病理特征的相关性（例）

参数		例数	PD-L1表达水平		P值
参数		例数	低表达	高表达	P值
年龄（岁）		?	?	?	0.272
?	≤50	14	5	9	?
?	>50	16	10	6	?
饮酒史		?	?	?	0.042
?	无	25	15	10	?
?	有	5	0	5	?
乙肝病史		?	?	?	1.000
?	无	11	6	5	?
?	有	19	9	10	?
肝硬化		?	?	?	0.682
?	无	8	5	3	?
?	有	22	10	12	?
肿瘤数目		?	?	?	0.710
?	单发	18	8	10	?
?	多发	12	7	5	?
肿瘤直径（cm）		?	?	?	1.000
?	≤5	17	9	8	?
?	>5	13	6	7	?
静脉癌栓		?	?	?	0.427
?	无	21	12	9	?
?	有	9	3	6	?
微血管癌栓		?	?	?	0.143
?	无	15	10	5	?
?	有	15	5	10	?
肝被膜侵犯		?	?	?	0.715
?	无	16	9	7	?
?	有	14	6	8	?
远处转移		?	?	?	1.000
?	无	23	12	11	?
?	有	7	3	4	?
TNM分期		?	?	?	1.000
?	Ⅰ/Ⅱ期	14	7	7	?
?	Ⅲ/Ⅳ期	16	8	8	?
AFP（μg/L）		?	?	?	0.651
?	≤400	24	13	11	?
?	>400	6	2	4	?
HBsAg		?	?	?	0.715
?	阴性	16	9	7	?
?	阳性	14	6	8	?

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